کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی

Authors

سمیه کدخدایان

somayeh kadkhodayan department of biology, sciences and research branch, islamic azad university, tehran, iran.گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران. شیوا ایرانی

shiva irani department of biology, science and research branch, islamic azad university, tehran, iranگروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (islamic azad university science and research branch) سید مهدی سادات

seyed mehdi sadat department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran, tehran, iran.بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (islamic azad university science and research branch) فاطمه فتوحی

fatemeh fotouhi influenza research lab., department of virology, pasteur institute of iran, tehran, iran.آزمایشگاه تحقیقاتی آنفلوانزا، بخش ویروس شناسی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران.سازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (pasteur institute of iran) اعظم بوالحسنی

abstract

زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv توانسته است به عنوان یک پپتید نفوذ کننده سلولی (cpp) عمل نماید. در این تحقیق، برای اولین بار کلونینگ و بیان فیوژن tat-nef در باکتری اشرشیاکلی صورت گرفت. تأیید بیان پروتئین توسط آنالیز وسترن بلات و تخلیص آن از طریق روش رنگ آمیزی معکوس انجام شد. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، ابتدا کلونینگ فیوژن tat-nef در وکتور بیانی pgex6p2 صورت گرفت. سپس القای بیان پروتئین نوترکیب tat-nef در باکتری اشرشیا کلی سویه bl21 (de3) توسط القا کننده iptg انجام شد. تأیید بیان از طریق تکنیک sds-page و وسترن بلات با استفاده از آنتی بادی منوکلونال ضد nef صورت گرفت. سپس، تخلیص پروتئین فیوژن توسط تکنیک رنگ آمیزی معکوس از روی ژل انجام شد. یافته ها: نتایج آنالیز pcr و هضم آنزیمی، وجود باند واضح حدود 726 جفت باز را روی ژل آگارز تأیید کرد که نشان گر کلونینگ صحیح فیوژن tat-nef در وکتور بیان پروکاریوتی pgex6p2 بود. هم چنین، وجود باند پروتئینی حدود 54 کیلودالتون روی ژل sds-page نشان گر بیان پروتئین tat-nef بود که توسط آنتی بادی منوکلونال ضد nef در آنالیز وسترن بلات تأیید شد.  نتیجه گیری: پروتئین فیوژن نوترکیبtat-nef تخلیص شده به عنوان یک آنتی ژن برای طراحی واکسن پروتئینی در مقابل  عفونت ویروس hiv استفاده خواهد شد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

رنگ آمیزی معکوس: روشی مؤثر برای تخلیص پروتئین HIV-1 Nef در سیستم بیان پروکاریوتی

سابقه و هدف: پروتئین Nef، یکی از پروتئین­ های تنظیمی ویروس HIV، دارای اپی­توپ­ های حفاظت شده متعددی است که در افراد آلوده به ایدز پاسخ­ های ایمنی قدرتمندی علیه آن ها مشاهده شده است. بنابراین، پروتئین Nef کاندید مناسبی برای تولید واکسن می­ باشد. هدف این پژوهش کلونینگ و بیان پروتئین Nef در سیستم بیان پروکاریوتی و تخلیص آن به روش رنگ­آمیزی معکوس می­ باشد. مواد و روش­ ها: توالی کدکننده پروتئین Nef ...

full text

کلونینگ و بیان پروتئین tat ویروس hiv1 در سیستم پروکاریوتی

ژن tat hiv-1 پروتئینی kda16-14 را کد می کند و همانطور که از نام آن پیداست فعال کننده اصلی در رونویسی hiv1 است. پروتئین tat حاوی 101 اسید آمینه است که توسط 2 اگزون کد می شود و در مراحل اولیه عفونت ویروسی بیان می شود. tatیک پروتئین متصل شونده به rna است که رونویسی را در سطح طویل سازی rna تنظیم می کندبرای این منظور ، یک پلاسمید حاوی ژن tat (puc57-tat) ساخته شد. سپس ژنtat توسط آنزیم های xho1 و ncoi...

رنگ آمیزی معکوس: روشی مؤثر برای تخلیص پروتئین hiv-۱ nef در سیستم بیان پروکاریوتی

سابقه و هدف: پروتئین nef، یکی از پروتئین­های تنظیمی ویروس hiv، دارای اپی­توپ­ های حفاظت شده متعددی است که در افراد آلوده به ایدز پاسخ­ های ایمنی قدرتمندی علیه آنها مشاهده شده است. بنابراین، پروتئین nef کاندید مناسبی برای تولید واکسن می­ باشد. هدف این پژوهش کلونینگ و بیان پروتئین nef در سیستم بیان پروکاریوتی و تخلیص آن به روش رنگ­آمیزی معکوس می­ باشد. مواد و روش­ ها: توالی کدکننده پروتئین nef از...

full text

بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب ژن سنتتیک زنجیره HC تتانوتوکسین در سیستم بیانی پروکاریوت

زمینه و هدف: توکسین کلستریدیوم تتانی یا تتانواسپاسمین عامل بیماری مهلک کزاز است. امروزه از توکسوئید آن به عنوان واکسن استفاده می شود. تتانواسپاسمین شامل سه زنجیره L، HN و HC می باشد. زنجیره HC بخش اتصال دهنده و ایمونوژنیک آن است و به عنوان کاندیدای واکسن مطرح می باشد. هدف از این مطالعه، طراحی و تهیه ژن صناعی زنجیره HC تتانواسپاسمین، بیان و بهینه سازی آن و تخلیص پروتئین نوترکیب حاصل از آن به عنو...

full text

کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی

زمینه و اهداف: سویه های پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد. مواد و روش ‌ ها: ژن کد کننده پیلین (pilA) از سویه PAO1 سودوموناس آئروژینوزا با بوسیله PCR جدا گردید و در وکتور بیانی pET-22b کلون شد. تایید ساختار وکتور نوترکیب به وسیله ی هضم آنزیمی دوگانه و تعیین توالی صورت گرفت....

full text

کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین SNAP-25

Background & Objectives:Clostridial neurotoxin inhibits neurotransmitter release by selective and specific intracellular proteolysis of synaptosomal associated protein of 25KDa (SNAP-25), synaptobrevin/VAMP-2 and syntaxin. SNAP-25 is one of the components that forms docking complex in synaptic ends. This protein is subtrate for botulinum neurotoxins types A,C, and E. Each of these toxin serotyp...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
مجله دانشگاه علوم پزشکی اراک

جلد ۱۹، شماره ۴، صفحات ۶۰-۶۸

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023